Awọn ilana ti Akopọ Acid Nucleic

Iṣakojọpọ acid nucleic ni a ṣe ni lilo ọna ti o lagbara sialic amide triglyceride, nipa eyiti opin 3 ′ ti DNA jẹ aibikita lori sobusitireti alakoso ti o lagbara ati awọn nucleotides ti wa ni afikun ni itọsọna 3′ si 5′ titi ti ajẹkù DNA ti o fẹ yoo ti ṣajọpọ. .Eyi yato si iṣelọpọ DNA nipasẹ ohun elo ti DNA polymerase.

Ipari 3' ti ipilẹ akọkọ jẹ aibikita lori CPG lakoko iṣelọpọ, 5′-OH ti ipilẹ atẹle ti ni aabo pẹlu di-p-tolyl trityl DMT, ẹgbẹ amino lori ipilẹ jẹ aabo pẹlu benzoic acid ati 3′ -OH ti wa ni mu ṣiṣẹ pẹlu ohun amino fosifeti yellow.1 ipilẹ ti 5 5'-OH ti ipilẹ 1 ati 3'-OH ti ipilẹ ti o tẹle jẹ triglyceride phosphite, eyiti o jẹ oxidised pẹlu iodine si triglyceride fosifeti, aabo lori ipilẹ keji 5′-OH ti yọ kuro nipasẹ fifi dichloroacetic acid DM cycles nipasẹ awọn afikun ti awọn nigbamii ti mimọ, ati lẹhin kolaginni awọn aabo lori 5′-OH ti wa ni kuro pẹlu kan ko lagbara acid Ajeku ti ge-asopo lati awọn resini ri to pẹlu ogidi ammonium hydroxide, awọn aabo ti wa ni kuro lati awọn mimọ. pẹlu ammonium hydroxide ti o ni idojukọ labẹ alapapo, ammonium hydroxide ti yọ kuro, ajẹkù naa jẹ igbale ti o gbẹ, ati pe nucleic acid jẹ mimọ nipasẹ kiromatografi olomi tabi PAGE.

Awọn igbesẹ ti Oligo Synthesis

Idilọwọ

Awọn5 opin DMT ẹgbẹ idabobo ti yọkuro nipa fifi ojutu TCA kun.

Muu ṣiṣẹ

Dapọ ohun amuṣiṣẹ pẹlu monomer oligonucleotide lati ṣe agbedemeji oligonucleotide monomer ti nṣiṣe lọwọ.

Isopọpọ

Ẹgbẹ hydroxyl 5-terminal n ṣe atunṣe pẹlu agbedemeji oligonucleotide ti nṣiṣe lọwọ ninu iṣesi ifasilẹ ti ipilẹṣẹ lati ṣe agbekalẹ asopọ phosphite triglyceride aiduroṣinṣin.

Fifọ 

Ipilẹṣẹ aṣoju capping n ṣe ifapa capping acetylation pẹlu awọn ẹgbẹ hydroxyl pupọ ti ko ni ipa ninu iṣesi ifunmọ.

Oxidiation 

Ipilẹṣẹ ojutu iodine ti o ni omi ṣe atunṣe pẹlu awọn ifunmọ phosphite ti ko ni iduroṣinṣin nipasẹ ifoyina lati ṣe awọn ifunmọ phosphoric acid triglyceride iduroṣinṣin.

Cyanoethyl Cleavage

Ọja nucleic acid lẹhin iṣelọpọ, pẹlu afikun ti ojutu DEA lati yọ ẹgbẹ cyanoethyl kuro ni asopọ triglyceride fosifeti.

Pipade&Aabo

Awọn ajẹkù acid nucleic ti wa ni fifọ lati ọdọ alaṣẹ ti o ni agbara nipasẹ fifi kun ojutu ammonium hydroxide ti o ni idojukọ ati lẹhinna kikan lati yọ awọn ẹgbẹ aabo kuro lati awọn ifunmọ hydrogen ti awọn ipilẹ.